A limpeza clonal seguida de pré-imunização com complexos protetivos do Citrus tristeza virus(CTV) possibilitaram o cultivo comercial da laranja Pêra, variedade de relevante importância para a citricultura brasileira, mas sensível ao vírus. O emprego de isolados fracos protetivos em outras variedades de citros, mesmo com maior tolerância ao CTV, pode ser também de interesse para evitar a dispersão de isolados severos. O objetivo desta pesquisa foi caracterizar, por meio da análise SSCP (Single Strand Conformational Polymorphism) do gene da proteína do capsídeo, isolados de CTV presentes em plantas das cultivares de laranjas doce Pêra, Hamlin e Valência, propagadas de quatro fontes de borbulhas: 1) clones velhos, 2) clones nucelares, 3) clones microenxertados e 4) clones microenxertados pré-imunizados com o isolado fraco protetivo 'PIAC' do CTV. Avaliou-se ainda a correlação dos padrões SSCP obtidos com intensidade de caneluras no lenho, vigor e produção de frutos. Resultados do SSCP demonstraram baixa diversidade genética entre isolados presentes em diferentes plantas da mesma variedade e mesma fonte de borbulhas, e em alguns casos, em diferentes fontes de borbulhas e variedades. Para os sintomas de tristeza, observou-se menores intensidades em plantas dos clones novos, microenxertados e, dos microenxertados pré-imunizados sobre clones velhos das três variedades. Os padrões SSCP e a sintomatologia observados sugeriram que complexos mais fortes do CTV estão infectando as plantas dos clones velhos das três variedades. A estabilidade do complexo protetivo foi observada nos padrões SSCP dos isolados de CTV de alguns dos clones microenxertados e pré-imunizados. Concluiu-se que as alterações detectadas em outros perfis eletroforéticos deste tratamento não provocaram a perda da capacidade protetiva do isolado 'PIAC' de CTV, inoculado na pré-imunização.

Clonal cleaning, followed by pre-immunization with protective complexes of Citrus tristeza virus(CTV), allowed the commercial cultivation of Pêra sweet orange, a variety that has great importance for Brazilian citriculture but is sensitive to the virus. The use of mild protective isolates in other citrus varieties, even those more tolerant to CTV, can also be of interest to prevent the spread of severe isolates. The aim of this study was to characterize, by means of SSCP (Single Strand Conformational Polymorphism) analysis of the coat protein gene, CTV isolates present in plants of the sweet orange cultivars Pêra, Hamlin and Valencia propagated from four budwood sources: 1) old lines, 2) nucellar lines, 3) shoot-tip-grafted lines, and 4) shoot-tip-grafted lines pre-immunized with the mild CTV protective isolate 'PIAC'. We also evaluated the correlation of the obtained SSCP patterns to stem pitting intensity, tree vigor and fruit yield. SSCP results showed low genetic diversity among the isolates present in different trees of the same variety and same budwood source and, in some cases, in different budwood sources and varieties. Considering tristeza symptoms, lower intensity was noted for plants of new, shoot-tip-grafted and pre-immunized shoot-tip-grafted lines, compared to old lines of the three varieties. The observed SSCP patterns and symptomatology suggested that more severe CTV complexes infect the plants of old lines of all three varieties. The protective complex stability was observed in the SSCP patterns of CTV isolates of some shoot-tip-grafted and pre-immunized clones. It was concluded that the changes detected in other electrophoretic profiles of this treatment did not cause loss of the protective capacity of CTV isolate 'PIAC' inoculated in the pre-immunization.

Isolados do vírus da tristeza dos citros (CTV) de 35 acessos de pomelos que fazem parte do Banco Ativo de Germoplasma de Citros, localizado no Centro APTA Citros Sylvio Moreira, Cordeirópolis, São Paulo, Brasil, pertencente ao Instituto Agronômico de Campinas (IAC), foram caracterizados através dos sintomas observados nas árvores, indexação biológica, diagnóstico imunológico e análise SSCP (polimorfismo de conformação de fita simples) do gene da proteína do capsídeo. O grupo de plantas que, em geral, apresentou menor volume de copa e severo sintoma de canelura diferenciou-se significativamente do grupo com maior desenvolvimento vegetativo e fraco a moderado sintoma de canelura. No entanto, a maioria dos isolados de CTV das plantas de ambos os grupos induziu fraca reação em limão galego e nenhuma relação entre títulos do vírus nos tecidos e sintomatologia foi observada na avaliação sorológica conduzida por DAS-ELISA. A reação com diferentes anticorpos monoclonais e os distintos padrões eletroforéticos obtidos por SSCP demonstraram que há uma grande diversidade entre os isolados de CTV que infectam os acessos de pomelos. Alta complexidade de bandas dentro de um mesmo isolado foi também observada nos perfis SSCP, demonstrando que cada isolado é constituído por uma mistura de diferentes haplótipos de CTV. Padrões SSCP semelhantes foram observados entre algumas plantas com fortes sintomas de caneluras e entre algumas plantas com sintomas fracos ou moderados de caneluras.

Citrus tristeza virus (CTV) isolates from 35 grapefruit accessions belonging to Citrus Active Germplasm Bank of the "Instituto Agronômico de Campinas" located at the "Centro APTA Citros Sylvio Moreira", Cordeirópolis, São Paulo state, Brazil, were characterized and evaluated through symptoms in the trees, biological indexing, immunological diagnosis with different monoclonal antibodies and SSCP analysis (single-strand conformation polymorphism) of the coat protein gene. Symptomatology indicated that, in general, the group of plants with smaller canopy volume and severe stem pitting differed significantly from the group that presented greater vegetative development and mild to moderate stem pitting. However, the isolates from most of the accessions induced mild reaction on Mexican lime. The serological evaluation through the DAS-ELISA using monoclonal antibodies did not reveal any association between virus titer in the plant tissue and symptoms. The reaction with different monoclonal antibodies and the distinct electrophoresis patterns obtained through SSCP showed that there is a high degree of diversity among the isolates that infect these grapefruit accessions. High complexity within the same isolate was also observed in the SSCP profiles. This finding indicates that the CTV isolates from these plants are a complex mixture of CTV haplotypes. Similar SSCP banding patterns were observed among some plants with strong stem pitting symptoms, and among some plants with weak or moderate stem pitting symptoms.